Der HPLC–Schrauber

Probe ins Gerät stellen, Knopf drücken, Ergebnis erhalten so reibungslos verläuft der Laboralltag mitHPLC–Geräten selten. Oft sind es Kleinigkeiten, die zuStörungen führen, und nicht immer muss der Kundendienstsofort bestellt werden.

Wer weiß, an welchen Teilen geschraubt werden darf und anwelchen nicht, kann kleine Probleme selbst beheben leicht,schnell, ohne großen Kostenaufwand. Mit dem gesammelten Wissenaus dreißig Jahren Serviceerfahrung führt derHPLCSchrauber den Anwender an Aufbau und Funktionsweise seinesGerätes heran und verzichtet dabei bewusst auf theoretischenBallast. Stattdessen zeigen wertvolle Hinweise, die so nicht in denHandbüchern der Hersteller zu fi nden sind, wie manFehlerquellen aufdeckt und beseitigt.

Aus der Praxis für die Praxis für alleSchrauberinnen und Schrauber, die gern selbst zum Werkzeug greifen,wenn das HPLC–Gerät mal wieder nicht so funktioniert, wie essoll

Der HPLC–Schrauber IX

Einleitung XI

1 Die Pumpe 1

1.1 Die parallele Doppelkolbenpumpe 4

1.2 Kompressibilität 6

1.3 Die serielle Doppelkolbenpumpe 7

1.4 Jetzt wollen wir unsere Pumpen zerlegen 8

1.4.1 Ventile 10

1.4.2 Kolben und Dichtungen 18

1.4.2.1 Kolben 18

1.4.2.2 Die Kolbendichtung 20

1.5 Die Pumpe überprüfen 23

1.6 Die Gradientenpumpe 26

1.6.1 Binäre Hochdruckgradientenpumpe 27

1.6.1.1 Zusammenfassung 30

1.6.2 Wie überprüfe ich die Gradientengenauigkeit?31

1.6.3 Bauformen von Gradientenventilen 33

1.7 Druckmessung und Anzeige 33

2 Mehr Licht! UV– und Diodenarray–Detektor 37

2.1 Der UV–Detektor 37

2.1.1 Funktionsprinzip eines UV–Detektors 38

2.1.2 Aufbau eines UV–Detektors mit variabler Wellenlänge39

2.2 Der Diodenarray–Detektor 49

2.3 Fehlermöglichkeiten 52

2.4 Reparaturmöglichkeiten 52

3 Fluoreszenzdetektor 53

3.1 Ozon und ozonfrei 55

3.2 Raman–Spektrum 58

3.3 Quenching 59

3.4 Entsorgung 59

4 Der Lichtstrahl geht so lange zur Zelle, bis er bricht61

4.1 Funktionsweise eines RI–Detektors 62

4.2 Aufbau eines modernen RI–Detektors 66

4.2.1 Sturm im Wasserglas 67

4.3 Prüfung und Kalibrierung 67

4.4 Fehlermöglichkeiten 68

4.5 Reparaturmöglichkeiten 68

5 Die Luft muss raus! Degaser 69

5.1 Wie können wir die gelöste Luft aus einerFlüssigkeit entfernen? 71

5.1.1 Entgasen durch Ultraschall 71

5.1.2 Membran–Entgasung 72

5.2 Aufbau eines typischen Degasers für die HPLC 74

5.3 Typische Installation eines Degasers in der HPLC 76

5.4 Entgasungsleistung vs. Flowrate 77

5.5 Erkennung von Problemen durch Luft im Eluenten 78

5.6 Reparaturmöglichkeiten 78

6 Verbindungen nicht schlagend, aber dicht 79

6.1 Wie funktioniert eine Fittingschraube? 82

6.2 Wie schneide ich einen PTFE–Schlauch ab? 84

6.3 Druck–Sachen 84

6.4 Welche Leitung verwenden wir an welcher Stelle im System?85

6.5 Die Montage einer Kapillare am Injektor und an derSäule 86

6.6 Der Einfluss der verwendeten Kapillaren und Verbindungen aufdie Trennung der Peaks 92

6.6.1 Praktische Beispiele 92

6.7 Poiseuille sche Flüssigkeiten 94

6.8 Welche Kapillare an welche Stelle? 97

6.9 Auflösungsverlust durch Hohlräume 97

7 Heiß oder kalt? Säulenheizung 99

7.1 Sonderfall Peltier–Öfen 104

7.2 Der Gassensor 105

8 Wie kommt die Probe ins System? 107

8.1 Handbetriebenes Probenaufgabesystem 107

8.1.1 Funktionsweise 107

8.1.1.1 Der Weg der Probe in der Flüssigkeit 116

8.1.1.2 Installation von Probenschleifen 118

8.1.1.3 Vorwärts oder rückwärts? 118

8.2 Der automatische Probengeber 119

8.2.1 Fehlersuche und Reparatur 121

8.2.2 Autosampler mit Schleifenfüllung durch Spritze (1) die Probe wird in die Schleife gezogen 124

8.2.2.1 Fehlermöglichkeiten 125

8.2.3 Autosampler mit Schleifenfüllung (2) dieProbe wird in die Schleife gedrückt 126

8.2.4 Autosampler mit Direktinjektion 129

9 Der HPLC–Pulsationsdämpfer 133

10 Gerührt, nicht geschüttelt: Die HPLC–Mischkammerfür den Hochdruckgradientenbetrieb) 137

11 Das Datenauswertesystem Integratoren und Rechner143

11.1 Kommunikation des Datensystems mit den HPLC–Modulen 147

11.1.1 Zusammenfassung 150

12 Anhang 151

12.1 Passivierung nichtrostender Stähle in der HPLC 151

12.2 Materialkunde 153

Index 157

Werner Röpke, Jahrgang 1950, ist Mitbegründer undGeschäftsführer der TECHLAB GmbH in Braunschweig. NachTechnikerschule und diversen Fortbildungen hat er unter anderem ander Universität von Chiang Mai, Thailand, gearbeitet und dortdie instrumentelle Analytik betreut. Werner Röpke ist Inhaberverschiedener Patente auf dem Gebiet der Hochleistungsflüssigkeitschromatographie und hat sich während derTätigkeit in seiner Firma umfassendes Wissen überHochdruckpumpen und sonstige HPLC–Hardware angeeignet.